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说话:Eng

| 中文名称 |
醇酰唬;;;;;;泼福ˋAT)活性测定试剂盒 |
| 规格 | 24样 |
| 货号 |
L-770-SH |
| 价值 | ¥2000 |
| 样本类型 | 血清,,,,,血浆,,,,,组织匀浆,,,,,细胞裂解液、细胞造就上清液等 |
| 检测领域 | 详见说明书 |
| 检测步骤 |
可见分光光度法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 征询我司业务员获取 |
| 文件 | 征询我司业务员获取 |
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差距大的样本做预测定。。。。。。。。
测定意思:
AAT是一个多职能蛋白各人族,,,,,重要掌管催化生物体内各类酰唬;;;;;;腿ヵ;;;;;;;;从常,,,,在基因表白、代谢和信号传导中拥有沉要作用。。。。。。。。
测定道理:
AAT催化乙酰CoA转移乙酰唬;;;;;;蕉〈迹,,,,开释的CoA还原DTNB天生TNB;;;;;;;;TNB在412nm有吸收峰,,,,,测定412 nm吸光度增长快度可推算AAT活性。。。。。。。。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心理、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、无水乙醇。。。。。。。。
试剂组成和配造:
提取液:液体25mL×1瓶,,,,,4℃保留;;;;;;;;
试剂一:液体25mL×1瓶,,,,,4℃保留;;;;;;;;
试剂二:粉剂×1瓶,,,,,-20℃保留。。。。。。。。
试剂三:粉剂×1支,,,,,4℃避光保留。。。。。。。。
粗酶液提。。。。。。。。
1. 组织:依照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,,,,,参与1mL提取液)进行冰浴匀浆。。。。。。。。8000g,,,,,4℃离心10min,,,,,取上清置冰上待测。。。。。。。。
2. 细菌、真菌:依照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞参与1mL提取液),,,,,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,,,,,超声3秒,,,,,距离7秒,,,,,总功夫3min);;;;;;;;而后8000g,,,,,4℃,,,,,离心10min,,,,,取上清置于冰上待测。。。。。。。。
3. 液体:直接检测。。。。。。。。
AAT测定操作:
1、分光光度计预热30min,,,,,调节波长到412 nm,,,,,蒸馏水调零。。。。。。。。
2、工作液的配造:临用前在试剂二瓶中参与22.5mL试剂一,,,,,充分混匀待用。。。。。。。。用不完的试剂分装后-20℃保留,,,,,不容反复冻融。。。。。。。。
3、试剂三的配造:临用前加无水乙醇1.25mL充分溶化待用,,,,,用不完的试剂4℃保留。。。。。。。。
4、 空缺管:在Ep管或96孔板中参与50μL提取液和900μL工作液,,,,,充分混匀,,,,,35℃反映15min,,,,,参与50μL试剂三,,,,,充分混匀,,,,,25℃静置10min,,,,,测定412nm处吸光值,,,,,记为A空缺管。。。。。。。。
5、 测定管:在Ep管或96孔板中参与50μL样本和900μL工作液,,,,,充分混匀,,,,,35℃反映15min,,,,,参与50μL试剂三,,,,,充分混匀,,,,,25℃静置10min,,,,,测定412nm处吸光值,,,,,记为A测定管。。。。。。。。△A=A测定管- A空缺管,,,,,空缺管只有做一管。。。。。。。。
AAT活性推算公式:
(1)依照蛋白浓度推算
活性单元界说:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB界说为一个酶活单元。。。。。。。。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷(
×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 98.04×△A÷Cpr
(2)依照样性质量推算
活性单元界说:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB界说为一个酶活单元。。。。。。。。
AAT (nmol/min /g 鲜沉) = △A ÷(
×d)×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T = 98.04×△A÷W
(3)按细胞数量推算
活性单元界说:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB界说为一个酶活单元。。。。。。。。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷(
×d)×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T
= 98.04×△A÷ 细胞数量
(4)按液体体积推算
活性单元界说:每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB界说为一个酶活单元。。。。。。。。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷(
×d)×V反总÷V样÷T =98.04×△A
:TNB消光系数,,,,,13600L/mol/cm;;;;;;;;V反总:反映总体积,,,,,1mL;;;;;;;;V样:参与反映系统中上清液体积,,,,,0.05mL;;;;;;;;V样总:参与提取液体积,,,,,1mL;;;;;;;;Cpr:蛋白含量,,,,,mg/mL;;;;;;;;W:样性质量,,,,,g;;;;;;;;T:反映功夫,,,,,15 min。。。。。。。。
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