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说话:Eng

| 中文名称 |
脂肪酸合成酶(FAS)试剂盒 |
| 规格 | 24样 |
| 货号 |
L-762-SH |
| 价值 | ¥2000 |
| 样本类型 | 血清,,,,,,血浆,,,,,,组织匀浆,,,,,,细胞裂解液、细胞造就上清液等 |
| 检测领域 | 详见说明书 |
| 检测步骤 |
紫表分光光度法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 征询我司业务员获取 |
| 文件 | 征询我司业务员获取 |
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差距大的样本做预测定。。。。。。
测定意思:
FAS是脂肪酸合成关键酶,,,,,,催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而天生长链脂肪酸。。。。。。FAS普遍表白于各类组织细胞中,,,,,,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表白丰硕。。。。。。
测定道理:
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH天生长链脂肪酸和NADP+;;;;;;;;NADPH在340nm有吸收峰,,,,,,而NADP+没有;;;;;;;;通过测定340nm 光吸收降落速度,,,,,,推算FAS活性。。。。。。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心理、紫表分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。。。。。。
试剂组成和配造:
试剂一:液体25mL×1瓶,,,,,,-20℃保留。。。。。。用前1 d取出置于4℃充分解冻后混匀。。。。。。
试剂二:粉剂×1瓶,,,,,,4℃保留。。。。。。临用前参与550 μL试剂四,,,,,,充分溶化,,,,,,用不完的试剂分装后-20℃保留,,,,,,不容反复冻融。。。。。。
试剂三:粉剂×1瓶,,,,,,4℃保留。。。。。。临用前参与550 μL试剂四,,,,,,充分溶化,,,,,,用不完的试剂分装后-20℃保留,,,,,,不容反复冻融。。。。。。
试剂四:液体25mL×1瓶,,,,,,4℃保留。。。。。。
试剂五:粉剂×1瓶,,,,,,4℃保留。。。。。。临用前参与1050 μL试剂四,,,,,,充分溶化,,,,,,用不完的试剂分装后-20℃保留,,,,,,不容反复冻融。。。。。。
粗酶液提取。。。。。
1. 组织:依照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,,,,,,参与1mL试剂一)进行冰浴匀浆。。。。。。12000g,,,,,,4℃离心40min,,,,,,取上清置冰上待测。。。。。。
2. 细菌、真菌:依照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞参与1mL试剂一),,,,,,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,,,,,,超声3秒,,,,,,距离7秒,,,,,,总功夫3min);;;;;;;;而后12000g,,,,,,4℃,,,,,,离心40min,,,,,,取上清置于冰上待测。。。。。。
3. 血清等液体:直接测定。。。。。。
FAS测定操作:
1. 分光光度计预热30min,,,,,,调节波长到340 nm,,,,,,蒸馏水调零。。。。。。
2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。。。。。。
3. 测定管:在1mL石英比色皿中顺次参与100μL上清液、20μL试剂二、20μL试剂三、820μL试剂四和40μL试剂五,,,,,,迅速混匀后于340nm处测定吸光值,,,,,,纪录第30s和90s时吸光值,,,,,,别离纪录为A1和A2。。。。。。△A测=A1-A2。。。。。。
FAS活性推算公式:
(1)依照蛋白浓度推算
活性单元界说:37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单元。。。。。。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T
=1608×△A÷Cpr
(2)依照样性质量推算
活性单元界说:37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单元。。。。。。
FAS(nmol/min/g 鲜沉) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷W
(3)按细胞数量推算
活性单元界说:37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单元。。。。。。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷细胞数量
(4)按液体体积推算
活性单元界说:37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单元。。。。。。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T
=1608×△A
ε:NADPH摩尔消光系数,,,,,,6.22×103/mol/cm;;;;;;;;d:比色皿光径,,,,,,1 cm;;;;;;;;V反总:反映系统总体积,,,,,,1000μL=0.001 L;;;;;;;;Cpr:上清液蛋白质浓度,,,,,,mg/mL;;;;;;;;W:样性质量,,,,,,g;;;;;;;;V样:参与反映系统中上清液体积,,,,,,100μL=0.1 mL;;;;;;;;T:反映功夫,,,,,,1min。。。。。。
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