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流式细胞术（FCM）常见问题及解答
FCM是利用流式细胞仪对处在急剧直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、急剧的定性、定量分析或分析技术 。。。。。。。。然而，， ，，，，在FCM的现实利用过程中，， ，，，，要想得到高质量的流式数据却并非易事 。。。。。。。。现就FCM尝试中的常见问题进行分析，， ，，，，但愿能援手有关尝试人员提高尝试成功率 。。。。。。。。
一、怎么选择相宜的对照？？ ？？？？？
1）同型对照：使用同型抗体做平行尝试，， ，，，，重要主张是解除抗体与样本的非特异性结合 。。。。。。。。
2）阴性细胞对照：使用已知的不表白指标抗原的细胞做平行尝试，， ，，，，重要主张是解除抗体的非特异性结合 。。。。。。。。
3）二抗对照：第二抗体多为荧光象征的多抗，， ，，，，非特异性结合通常较高，， ，，，，可能造成基础荧光值偏高，， ，，，，设立二抗对照平行尝试的重要主张是解除二抗的非特异性荧光着色 。。。。。。。。
4）阳性对照：通常会使用已知的高表白指标抗原的细胞做平行尝试，， ，，，，重要主张是排除尝试中尝试步骤、试剂、操作等尝试的影响成分 。。。。。。。。
5）空缺对照：不进行任何象征的细胞，， ，，，，重要主张是用于测定基础荧光信号表白值 。。。。。。。。
二、网络的细胞通过流式仪检测时，， ，，，，通常几多的细胞量相宜？？ ？？？？？
进行流式检测时，， ，，，，至少必要纪录5000个活细胞，， ，，，，通常调整细胞密度至1*106/100ul进行流式检测 。。。。。。。。
三、FCM检测过程中若何设门（gating）？？ ？？？？？
通常凭据散射光进行设门，， ，，，，即我们通常所说的前散（forward scatter, FSC）和侧散（side scatter, SSC）来设门 。。。。。。。。FSC的大幼与细胞的直径成正有关，， ，，，，分歧的细胞，， ，，，，细胞越大，， ，，，，其FSC越大 ； ；；； ；；；反之越幼 。。。。。。。。SSC的大幼与细胞内颗粒结构的质量成正有关，， ，，，，分歧的细胞，， ，，，，细胞内颗粒结构越复杂，， ，，，，质量越大，， ，，，，其SSC越大 ； ；；； ；；；反之越幼 。。。。。。。。
四、FCM检测过程中若何调节赔偿？？ ？？？？？
在FCM检测过程中，， ，，，，若是存在多色，， ，，，，则必须进行荧光赔偿调节 。。。。。。。。调节赔偿首先要知路双阴性细胞的情况，， ，，，，其次，， ，，，，必必要用单阳和双阴性细胞 。。。。。。。。只有在有阴性细胞作为参照的情况下，， ，，，，能力既不会过多又不会过少地调节赔偿 。。。。。。。。
五、FCM检测时，， ，，，，每次尝试的细胞数肯定要一样吗？？ ？？？？？
FCM检测时，， ，，，，若不进行细胞计数而凭感触轻易进行尝试会直接影响尝试了局 。。。。。。。。当细胞量多而抗体量不变或细胞量不变而抗体量削减，， ，，，，那么荧光抗体均匀散布到每个阳性细胞上的量就会相对削减 。。。。。。。。由此可见，， ，，，，分歧的细胞量会影响最终的尝试了局 。。。。。。。。因而，， ，，，，在筹备样本时，， ，，，，必须进行细胞计数，， ，，，，使每个分组及每次尝试的细胞数维持一致 。。。。。。。。
六、FCM检测时，， ，，，，若是存在多色分析，， ，，，，应该若何进行配色呢？？ ？？？？？
在FCM检测过程中，， ，，，，若是存在多色分析，， ，，，，固然能够通过荧光赔偿来解除荧光光谱沉叠的影响 。。。。。。。。但调节赔偿过大在肯定水平上依然会影响测值的正确性，， ，，，，因而，， ，，，，我们通常建议尽量选择荧光光谱沉叠少的荧光抗体组合 。。。。。。。。
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