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注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差距大的样本做预测定。。。。。。

测定意思：

哺乳动物CarE，，，，，，也称脂族酯酶（aliesterase），，，，，，宽泛散布于组织和器官，，，，，，属于丝氨酸水解酶家族。。。。。。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与表源性物质水解，，，，，，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。。。。。。CarE参加脂质运输和代谢，，，，，，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，，，，，，有机磷农药可结归并且抑造CarE活性。。。。。。

把稳：空缺管只需测定一次。。。。。。

CarE活性推算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的推算公式如下

1 组织中CarE活性

（1） 按蛋白浓度推算

CarE活性单元界说：每mg组织蛋白在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷Cpr

（2） 按样本鲜沉推算

CarE活性单元界说：每g组织在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/g 鲜沉)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单元界说：每1万个细菌或细胞在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为一个CarE活性单元。。。。。。

CarE酶活(U/10⁴ cell)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（10⁴ cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷细胞密度（10⁴ cell/mL）

3. 液体中CarE活性

CarE活性单元界说：每毫升样品在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷V样÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)

V反总：反映系统总体积，，，，，，205μL=2.05×10^-4L；；；；；；；V样总：上清液总体积，，，，，，1 mL；；；；；；；V样：参与上清液体积(mL)，，，，，，0.005 mL；；；；；；；Cpr：蛋白质浓度，，，，，，mg/mL；；；；；；；W：样品质量（g）；；；；；；；T：反映功夫（min），，，，，，3min。。。。。。

b. 使用96孔板测定的推算公式如下

1 组织中CarE活性

（3） 按蛋白浓度推算

CarE活性单元界说：每mg组织蛋白在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷Cpr

（4） 按样本鲜沉推算

CarE活性单元界说：每g组织在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/g 鲜沉)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单元界说：每1万个细菌或细胞在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为一个CarE活

性单元。。。。。。

CarE酶活(U/10⁴ cell)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（10⁴ cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷细胞密度（10⁴ cell/mL）

3. 液体中CarE活性

CarE活性单元界说：每毫升样品在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷V样÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)

V反总：反映系统总体积，，，，，，205μL=2.05×10^-4L；；；；；；；V样总：上清液总体积，，，，，，1 mL；；；；；；；V样：参与上清液体积(mL)，，，，，，0.005 mL；；；；；；；Cpr：蛋白质浓度，，，，，，mg/mL；；；；；；；W：样品质量（g）；；；；；；；T：反映功夫（min），，，，，，3min。。。。。。

测定道理：

CarE能催化乙酸-1-萘酯天生萘酯，，，，，，固篮显色；；；；；；；在450 nm光吸收增长快度，，，，，，推算CarE活性。。。。。。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心理、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。。。。。。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1瓶，，，，，，4℃保留。。。。。。

试剂二：液体15mL×2瓶，，，，，， 4℃保留；；；；；；；

试剂三：粉剂×2支，，，，，， 4℃保留，，，，，，临用前取1支试剂三，，，，，，加0.6ml无水乙醇充分溶化；；；；；；；

试剂四：粉剂×2支，，，，，，-20℃保留，，，，，，临用前取1支试剂四，，，，，，加少量试剂二溶化；；；；；；；

工作液配造：临用前配造，，，，，，向1瓶试剂二中，，，，，，参与溶化后的试剂三和试剂四各1支，，，，，，充分溶化，，，，，，过滤，，，，，，4℃避光保留，，，，，，可用1周。。。。。。

粗酶液提。。。。。。

细菌、细胞样品造备

网络细菌或细胞到离心管内，，，，，，离心后弃上清；；；；；；；依照每200万细菌或细胞参与400μL试剂一，，，，，，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，，，，，，超声3s，，，，，，距离10s，，，，，，沉复30次）；；；；；；；12000g 4℃离心30min，，，，，，取上清液待测。。。。。。

2、组织：依照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，，，，，，参与1mL试剂一）进行冰浴匀浆；；；；；；；12000g 4℃离心30min，，，，，，取上清液待测。。。。。。

3、液体：直接测定

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，，，，，，调节波长到450 nm，，，，，，蒸馏水调零。。。。。。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。。。。。。

3. 空缺管：取微量玻璃比色皿/96孔板，，，，，，顺次参与5μL蒸馏水和200μL试剂二，，，，，，迅速混匀，，，，，，于450nm处测定3min内吸光值变动，，，，，，第10s吸光值记为A1，，，，，，第190s吸光值记为A2。。。。。。△A空缺管=A2-A1

4. 测定管：取微量玻璃比色皿/96孔板，，，，，，顺次参与5μL上清液和200μL试剂二，，，，，，迅速混匀，，，，，，于450nm处测定3min内吸光值变动，，，，，，第10s吸光值记为A3，，，，，，第190s吸光值记为A4。。。。。。△A测定管=A4-A3

把稳：空缺管只需测定一次。。。。。。

CarE活性推算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的推算公式如下

1 组织中CarE活性

（1） 按蛋白浓度推算

CarE活性单元界说：每mg组织蛋白在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷Cpr

（2） 按样本鲜沉推算

CarE活性单元界说：每g组织在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/g 鲜沉)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单元界说：每1万个细菌或细胞在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为一个CarE活性单元。。。。。。

CarE酶活(U/10⁴ cell)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（10⁴ cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷细胞密度（10⁴ cell/mL）

3. 液体中CarE活性

CarE活性单元界说：每毫升样品在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷V样÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)

V反总：反映系统总体积，，，，，，205μL=2.05×10^-4L；；；；；；；V样总：上清液总体积，，，，，，1 mL；；；；；；；V样：参与上清液体积(mL)，，，，，，0.005 mL；；；；；；；Cpr：蛋白质浓度，，，，，，mg/mL；；；；；；；W：样品质量（g）；；；；；；；T：反映功夫（min），，，，，，3min。。。。。。

b. 使用96孔板测定的推算公式如下

1 组织中CarE活性

（3） 按蛋白浓度推算

CarE活性单元界说：每mg组织蛋白在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷Cpr

（4） 按样本鲜沉推算

CarE活性单元界说：每g组织在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/g 鲜沉)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷W

2 细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单元界说：每1万个细菌或细胞在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为一个CarE活性单元。。。。。。

CarE酶活(U/10⁴ cell)= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（10⁴ cell/mL）÷T=13.67×(△A测定管-△A空缺管)÷细胞密度（10⁴ cell/mL）

3. 液体中CarE活性

CarE活性单元界说：每毫升样品在37℃反映系统中每分钟催化吸光值增长1界说为1个酶活单元。。。。。。

CarE酶活(U/mL )= (△A测定管-△A空缺管) ×V反总÷V样÷T

=13.67×(△A测定管-△A空缺管)

V反总：反映系统总体积，，，，，，205μL=2.05×10^-4L；；；；；；；V样总：上清液总体积，，，，，，1 mL；；；；；；；V样：参与上清液体积(mL)，，，，，，0.005 mL；；；；；；；Cpr：蛋白质浓度，，，，，，mg/mL；；；；；；；W：样品质量（g）；；；；；；；T：反映功夫（min），，，，，，3min。。。。。。