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WB条带大幼和蛋白预测八字不合?先查抄这5点!
尝试室玄学千千万，，，，，，，，预测和了局不符占一半。。。。。。。
WB尝试是各位同学们，，，，，，，，时常光顾的一个尝试。。。。。。。但就是这样一个低级又常用的尝试，，，，，，，，却会出现各类稀罕古怪的问题。。。。。。。好比在WB尝试鉴定蛋白时，，，，，，，，我们得到的蛋白质条带大幼时时 ；；；；；；岷驮げ庵涤兴蟛。。。。。。。这是身患“胁迫症”的同学们不能忍的。。。。。。。若是是尝试犯错或者预测禁绝这种情况，，，，，，，，幼编是没法子跳出手机屏幕救你了。。。。。。。但这下面的 5 条准则，，，，，，，，同学们倒是能够珍藏一下，，，，，，，，在遇到蛋白质条带大幼和预测值误差的时辰，，，，，，，，拿出来分析一下。。。。。。。
一、内源性蛋白or沉组蛋白
查问题要从源头查起，，，，，，，，所以各位艾粉们要先看一看样品是内源性蛋白还是沉组蛋白?
若是是内源性蛋白还不打紧，，，，，，，，若是是沉组蛋白，，，，，，，，那么顿时就要看一看沉组蛋白是否为全长序列了。。。。。。。如果样品是沉组蛋白，，，，，，，，还不是全长序列，，，，，，，，那么条带大幼肯定会和预测大幼不一致。。。。。。。
二、多个 isoform 辨仔细
若是确定了样品是内源蛋白，，，，，，，，那就要看看腾博官网指标蛋白是不是有其他的 isoform，，，，，，，，这个我们通常 ；；；；；；崛ゲ榭 NCBI 或者 SWISSPROT 来确认。。。。。。。
三、剪切活化要把稳
若是在 SWISSPROT 或者权威的文件里提到了，，，，，，，，样品的这个蛋白必要剪切活化，，，，，，，，那么了局又要和预测值分歧啦。。。。。。。
四、成倍增长多聚体
若是蛋白大幼和预测值有显著倍数关系，，，，，，，，那就要思考一下这个蛋白是不是二聚体或者多聚体啦。。。。。。。
五、蛋白建饰要变大
若是排除了以上 4 条原因，，，，，，，，预测值和尝试了局不一致，，，，，，，，那就是由于我们面对的蛋白质，，，，，，，，是个善变的对象，，，，，，，，它不仅会剪切活化，，，，，，，，还有在翻译表白后建饰。。。。。。。好比：好比甲基化、乙酰 ；；；；；；⒘姿峄⑻腔⑼榛⑸锼鼗⒐劝彼峄⒏拾彼峄⒘蛩峄⒁煳於烯化、硫酸楚化、磷酸泛酰巯基乙胺基化……。。。。。。。在分歧状态下的蛋白质还会有分歧的建饰。。。。。。。参与了官能团注定会让蛋白质比预测值偏大。。。。。。。在日常的尝试中，，，，，，，，糖基化是比力常见的建饰，，，，，，，，通常会导致跑出来的条带比预测值大那么一些。。。。。。。
总结：
1.确定蛋白是内源的还是表源的，，，，，，，，若是是表源蛋白是不是全长序列;
2.SWISSPROT 数据库查问该蛋白是否有其他 isoform;
3.SWISSPROT 和文件查问蛋白质是否有剪切活化，，，，，，，，剪切活化造成蛋白变幼;
4.确定蛋白质是否是二聚体或多聚体。。。。。。。
5.NCBI 和 SWISSPROT 查问蛋白质表白后是否有建饰，，，，，，，，如有建饰会导致蛋白质增大;
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