欢迎选择我们，，，，，，腾博官网！免费服务热线：400-0899-208 防伪查问
说话：Eng
行业新闻
谷胱甘肽ELISA测定尝试齐全攻略
简介：
谷胱甘肽（glutathione，，，，，，r-glutamyl cysteingl +glycine，，，，，，GSH）是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，，，，，，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，，，，，，存在于险些身段的每一个细胞 。。。。。 。。。谷胱甘肽能援手维持正常的免疫系统职能，，，，，，并拥有抗氧化作用、整合解毒作用 。。。。。 。。。半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故常简写为G-SH），，，，，，易与某些药物、毒素等结合，，，，，，使其拥有整合解毒作用 。。。。。 。。。
操作步骤：
一、资料筹备
1. 包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸盐缓冲液：Na2CO3 0.159 g，，，，，，NaHCO3 0.294 g，，，，，，用蒸馏水溶化后，，，，，，定容至100 ml 。。。。。 。。。
2. PBS-T洗涤液：0.01mol/ pH7.4磷酸盐-氯化钠缓冲液：NaCl 8.0 g，，，，，，KH2PO4 0.2 g，，，，，，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，，，，，，KCl 0.2 g，，，，，，吐温-20 0.5 ml，，，，，，用蒸馏水溶化后，，，，，，定容至1000 ml 。。。。。 。。。
3. 底物溶液3，，，，，，3’，，，，，，5,5‘-四甲基联苯胺（TMB）贮存液及利用液：
（1）0.1 mol/l pH6.8 PBS：Na2HPO4·12H2O 1.09 g，，，，，，NaH2PO4·H2O 6.05 g，，，，，，蒸馏水溶化后定容至500 ml，，，，，，4℃保留备用 。。。。。 。。。
（2）TMB贮备液：TMB 60 mg 溶于10 ml 二甲基亚砜（DMSO）中4℃保留备用 。。。。。 。。。
（3）TMB利用液：临用前取0.1 mol/l pH6.0 PBS 10 ml，，，，，，TMB贮备液100 ul，，，，，，30%H2O2 15 ul 混匀即可 。。。。。 。。。
二、尝试步骤
1. 抗体包被
（1）抗体用包被液稀释至20 ug/ml，，，，，，参与聚苯乙烯反映板中每孔100 ul，，，，，，加盖后放4℃过夜 。。。。。 。。。
（2）倾去孔内液体，，，，，，参与洗涤液后静置3 min，，，，，，倾尽洗涤液，，，，，，沉复洗涤3次 。。。。。 。。。
（3）将反映板口在吸水纸上，，，，，，以除尽液体 。。。。。 。。。
2. 封关：每孔参与200 ul封关液，，，，，，37℃孵育60 min，，，，，，而后洗涤3次 。。。。。 。。。
3. 参与待测血清，，，，，，37℃温育1~2 h，，，，，，洗涤3次 。。。。。 。。。用稀释液作对照孔，，，，，，尺度曲线的造备是用不容稀释度的纯GST-π 。。。。。 。。。
4. 加酶标抗体：按要求稀释抗GST-π-IgG-HRP，，，，，，每孔100 ul，，，，，，37℃温育1 h，，，，，，而后洗涤5次，，，，，，扣在吸水纸上吸干水分 。。。。。 。。。
5. 显色：参与TMB利用液，，，，，，置室温反映15~30 min，，，，，，参与50 ul 2 mol/l H2SO4，，，，，，不变3~5 min，，，，，，即可比色 。。。。。 。。。
6. 比色：用酶标仪，，，，，，以PBS-T孔为对照，，，，，，波长450 nm，，，，，，测各孔光吸收度（A），，，，，，查尺度曲线，，，，，，即可测得GST-π含量 。。。。。 。。。
参考文件：
1.【文件标题】Tissue engineered artificial liver model based on viscoelastic hyaluronan-collagen hydrogel and the effect of EGCG intervention on ALD
2.【文件标题】Analysis of the effect of probucol-mecobalamin tablets combination on oxidative stress in patients with diabetic peripheral neuropathy
3.【文件标题】Effects of sublethal concentrations of cyantraniliprole on the biology and metabolic enzyme activities of Laodelphax striatellus (Fall′en)