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行业新闻
植物蛋白提取尝试注明
植物蛋白提取试剂合用于多种植物根， ，，，，，茎， ，，，，，叶及果实等的新鲜或冻存组织。。。 。。。植物组织成分复杂， ，，，，，含有较多酚类物质、多糖、色素、次生代谢物质等， ，，，，，以至植物蛋白质的分离提取变得难题和复杂。。。 。。。本试剂选取优化的试剂和法式， ，，，，，能有效提取多种植物中的可溶性和疏水性蛋白成分， ，，，，，有效去除植物组织所含的多酚、多糖、醌、色素、脂质、次生代谢物质等滋扰蛋白质钻研的成分， ，，，，，使提取的蛋白质处于蕞佳的活性状态和检测状态， ，，，，，适应于酶学活性测定， ，，，，，单向及双向蛋白电泳， ，，，，，Western Blot和免疫共沉淀分析等蛋白质钻研尝试。。。 。。。
组成和规格：无色通明的提取试剂50 ml或100 ml。。。 。。。
贮存：4°C， ，，，，，密封避光1年。。。 。。。
用处：提取多种植物组织和细胞的可溶性和疏水性蛋白。。。 。。。如苹果、花生、土豆、烟叶、菠菜、梅花等。。。 。。。
操作步骤：
1. 组织匀浆， ，，，，，必须充分匀浆， ，，，，，此步骤极度关键：
(1) 冻存组织匀浆：预先将研钵置于－20°C ~－70°C冰箱内冷冻。。。 。。。取液氮冻存的植物组织， ，，，，，放入冰冻的研钵内研磨至粉末状， ，，，，，把稳使组织一向处于冰冻状态， ，，，，，如组织色彩加深或变黑通常批注组织已消融。。。 。。。将研磨好的组织转移到EP 管中， ，，，，，按每200 mg植物组织加500 ul的比例加提取试剂， ，，，，，混匀后冰上搁置20分钟， ，，，，，其间可数次颠倒混匀， ，，，，，以便蛋白溶化。。。 。。。
(2) 新鲜组织匀浆：取新鲜组织放入研钵中， ，，，，，按每200 mg植物组织加500ul的比例加提取试剂， ，，，，，充分研磨使匀浆液中看不到大的块状或片状组织， ，，，，，保障组织研磨破碎。。。 。。。转移至离心管内， ，，，，，冰上搁置20分钟。。。 。。。
2. 离心：12000 g离心15分钟， ，，，，，弃去沉淀。。。 。。。蛋白在上清钟祝。。 。。。
3. 取离心后的上清， ，，，，，转移至新管， ，，，，，立即便用或－70°C冻存。。。 。。。通常上清内植物色素已根基去除， ，，，，，如有少量残留亦不影响蛋白定量及电泳尝试。。。 。。。建议用BCA步骤进蛋白定量（我公司的BCA蛋白定量试剂盒#P1511）。。。 。。。
如进行双向电泳或欲彻底断根色素等杂质可进行以下内骤:
1. 取上清液参与4倍体积的丙酮或甲醇混匀， ，，，，，－20°C至少一幼时以充分沉淀蛋白质。。。 。。。
2. 12000 g离心15分钟沉淀蛋白。。。 。。。
3. 弃去上清。。。 。。。天然干燥蛋白沉淀， ，，，，，凭据试验将沉淀溶于相应的缓冲液。。。 。。。如进行Western Blot 亦可用提取试剂溶化。。。 。。。
常见问题及解决步骤：
1. 提取的蛋白量少：
1) 组织蛋白含量较少， ，，，，，如水果等， ，，，，，可增长组织量；；；；；；；
2) 组织匀浆不充分， ，，，，，如纤维较多的组织， ，，，，，破碎较难题， ，，，，，应适当耽搁匀浆功夫；；；；；；；
3) 组织过老或水分迷失以至其干燥， ，，，，，故尽量选用新鲜较嫩的组织；；；；；；；
4) 甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶化不充分， ，，，，，应耽搁溶化功夫或使用较强的蛋白溶化剂。。。 。。。
2. 蛋白质量欠安：
1)提取的蛋白有多酚或色素等杂质残留， ，，，，，可沉复用丙酮或甲醇沉淀；；；；；；；
2) 蛋白质降解， ，，，，，操作各步骤均应在冰上进行；；；；；；；参与蛋白酶抑造剂。。。 。。。
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