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质粒转化的操作步骤你知路吗
1.根基道理
将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化（ Transformation ） 。。。 。。此感触态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状（感触态细菌的造备 ，，，，， ，见前） 。。。 。。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表表 ，，，，， ，经 42℃ 短功夫热冲击处置 ，，，，， ，推进细胞吸收 DNA 复合物 。。。 。。在丰硕造就基上成长数幼时后 ，，，，， ，球状细胞复原并割裂增殖 。。。 。。被转化的细菌中 ，，，，， ，表源基因得到表白 。。。 。。在选择性造就平板上 ，，，，， ，可选出所需的转化子（即含有质粒 DNA 的细菌） 。。。 。。钙处置的感触态细胞 ，，，，， ，通常每微克 DNA 能获得 10 5 ～ 10 6 个转化子 。。。 。。除化学步骤转化细菌表 ，，，，， ，还有电穿孔法（ Electroporation ） ，，，，， ，其转化率可高达 10 9 ～ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。。。 。。
2.器材
①造就皿 ②恒温造就箱
3.试剂
① LB 造就基
②选择性 LB 琼脂造就平板（含氨苄青霉素 ，，，，， ，终浓度为 50μg/ml ）
③氨苄青霉素 100 mg/ml
④宿主细菌：经 100 mmol/L CaCl 2 处置的感触态细菌 DH5α
4.操作步骤
①取 50 μL 大肠杆菌感触态细胞 ，，，，， ，参与适量质粒（体积不得超过 4 μL ）冰浴 30 min 后 ，，，，， ， 42℃ 热激 90 s ，，，，， ，顿时放回冰上 ，，，，， ，冰浴 2 min ；；；；；；；
②加 400 μL LB 造就基 ，，，，， ，于 37℃ 摇床慢摇振荡造就 45-60 min ；；；；；；；
③取 50-100 μL 涂在含有氨苄青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固体造就基上 ，，，，， ， 37℃ 颠倒造就过夜 。。。 。。
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