人胶原酶(Collagenase)ELISA试剂盒产品注明
检测领域:20IU/L -900IU/L
使用主张:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及有关液体样本中胶原酶(Collagenase)活性。。。。。。。。
尝试道理
本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中人胶原酶(Collagenase)水平。。。。。。。。用纯化的人胶原酶(Collagenase)抗体包被微孔板,,,,,造成固相抗体,,,,,往包被单抗的微孔中顺次参与胶原酶(Collagenase),,,,,再与HRP象征的胶原酶(Collagenase)抗体结合,,,,,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,,,,,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。。。。。。。。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,,,,,并在酸的作用下转化成最终的黄色。。。。。。。。色彩的深浅和样品中的胶原酶(Collagenase)呈正有关。。。。。。。。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),,,,,通过尺度曲线推算样品中人胶原酶(Collagenase)活性浓度。。。。。。。。
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,,,,,提取按有关文件进行,,,,,提取后应尽快进行尝试。。。。。。。。若不能顿时进行试验,,,,,可将标本放于-20℃保留,,,,,但应预防反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,,,,,因NaN3抑造辣根过氧化物酶的(HRP)活性。。。。。。。。
操作步骤
1.尺度品的稀释:本试剂盒提供原倍尺度品一支,,,,,用户可依照下列表在幼试管中进行稀释。。。。。。。。
800IU/L 5号尺度品 150μl的原倍尺度品参与150μl尺度品稀释液
400IU/L 4号尺度品 150μl的5号尺度品参与150μl尺度品稀释液
200IU/L 3号尺度品 150μl的4号尺度品参与150μl尺度品稀释液
100IU/L 2号尺度品 150μl的3号尺度品参与150μl尺度品稀释液
50IU/L 1号尺度品 150μl的2号尺度品参与150μl尺度品稀释液
2.加样:别离设空缺孔(空缺对照孔不加样品及酶标试剂,,,,,其余各步操作一样)、尺度孔、待测样品孔。。。。。。。。在酶标包被板上尺度品正确加样50μl,,,,,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,,,,,而后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。。。。。。。。加样将样品加于酶标板孔底部,,,,,尽量不触及孔壁,,,,,轻轻晃悠混匀。。。。。。。。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。。。。。。。。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:幼心揭掉封板膜,,,,,弃去液体,,,,,甩干,,,,,每孔加满洗涤液,,,,,静置30秒后弃去,,,,,如此沉复5次,,,,,拍干。。。。。。。。
6.加酶:每孔参与酶标试剂50μl,,,,,空缺孔之表。。。。。。。。
7.温育:操作同3。。。。。。。。
8.洗涤:操作同5。。。。。。。。
9.显色:每孔先参与显色剂A50μl,,,,,再参与显色剂B50μl,,,,,轻轻震荡混匀,,,,,37℃避鲜明色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,,,,,终止反映(此时蓝色立转黄色)。。。。。。。。
11.测定:以空缺孔调零,,,,,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。。。。。。。。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。。。。。。。。
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